Pura Saposhnikovia divaricata oleo por kandelo kaj sapo faranta pograndan disvastigilon esenca oleo nova por kanaj bruligiloj
mallonga priskribo:
2.1. Preparado de SDE
La rizomoj de SD estis aĉetitaj kiel sekigita herbo de Hanherb Co. (Guri, Koreio). La plantaj materialoj estis taksonomie konfirmitaj de D-ro Go-Ya Choi de la Korea Instituto de Orienta Medicino (KIOM). Kuponspecimeno (numero 2014 SDE-6) estis deponita en la Korea Herbario de Normaj Herbaj Rimedoj. Sekigitaj rizomoj de SD (320 g) estis ĉerpitaj dufoje kun 70% etanolo (kun 2 h refluo) kaj la ekstrakto tiam estis koncentrita sub reduktita premo. La dekokto estis filtrita, liofiligita, kaj stokita je 4 °C. La rendimento de sekigita ekstrakto el krudaj komencaj materialoj estis 48.13% (w/w).
Kromatografia analizo estis farita per HPLC-sistemo (Waters Co., Milford, MA, Usono) kaj fotodioda tabeldetektilo. Por la HPLC-analizo de SDE, la prim-O-glucosylcimifugin-normo estis aĉetita de la Korea Promocia Instituto por Tradicia Medicino-Industrio (Gyeongsan, Koreio), kajsek-O-glukosilhamaudol kaj 4′-O-β-D-glukosil-5-O-methylvisamminol estis izolita ene de nia laboratorio kaj identigita per spektraj analizoj, ĉefe per NMR kaj MS.
SDE-provaĵoj (0.1 mg) estis solvita en 70% etanolo (10 mL). Kromatografia apartigo estis farita per XSelect HSS T3 C18-kolumno (4.6 × 250 mm, 5μm, Waters Co., Milford, MA, Usono). La movebla fazo konsistis el acetonitrilo (A) kaj 0,1% acetacido en akvo (B) kun flukvanto de 1,0 mL/min. Plurpaŝa gradientprogramo estis uzata jene: 5% A (0 min), 5-20% A (0-10 min), 20% A (10-23 min), kaj 20-65% A (23-40 min). ). La detekta ondolongo estis skanita je 210-400 nm kaj registrita je 254 nm. La injekta volumo estis 10,0μL. Normaj solvoj por la determino de tri kromonoj estis preparitaj ĉe fina koncentriĝo de 7.781 mg/mL (prim-O-glukosilcimifugin), 31,125 mg/mL (4′-O-β-D-glukosil-5-O-metilvisaminol), kaj 31,125 mg/mL (sek-O-glucosylhamaudol) en metanolo kaj konservita je 4 °C.
2.3. Taksado de Kontraŭinflama AgadoIn Vitro
2.3.1. Ĉela Kulturo kaj Specimena Traktado
RAW 264.7 ĉeloj estis akiritaj de la American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, Usono) kaj kreskigitaj en DMEM-medio enhavanta 1% antibiotikojn kaj 5.5% FBS. Ĉeloj estis kovataj en humidigita atmosfero de 5% CO2 je 37 °C. Por stimuli la ĉelojn, la medio estis anstataŭigita per freŝa DMEM-medio, kaj lipopolisakarido (LPS, Sigma-Aldrich Chemical Co., St. Louis, MO, Usono) ĉe 1μg/mL estis aldonita en la ĉeesto aŭ foresto de SDE (200 aŭ 400μg/mL) dum pliaj 24 horoj.
2.3.2. Determino de Nitra Rusto (NO), Prostaglandin E2 (PGE2), Tumora Necrosis Faktoro-α(TNF-α), kaj Interleukin-6 (IL-6) Produktado
Ĉeloj estis traktitaj per SDE kaj stimulitaj per LPS dum 24 horoj. NENIA produktado estis analizita per mezurado de nitrito uzante la Griess-reakciilon laŭ antaŭa studo [12]. Sekrecio de la inflamaj citokinoj PGE2, TNF-α, kaj IL-6 estis determinita uzante ELISA ilaron (R&D-sistemoj) laŭ fabrikistinstrukcioj. La efikoj de SDE sur NO kaj citokinproduktado estis determinitaj ĉe 540 nm aŭ 450 nm uzante Wallac EnVision.™mikroplatleganto (PerkinElmer).
2.4. Taksado de Antiosteoartritis AktivecoIn Vivo
2.4.1. Bestoj
Masklaj Sprague-Dawley-ratoj (7 semajnoj aĝaj) estis aĉetitaj de Samtako Inc. (Osan, Koreio) kaj loĝigitaj sub kontrolitaj kondiĉoj kun 12-h lumo/malluma ciklo je°C kaj% humido. Ratoj estis provizitaj per laboratoria dieto kaj akvoad libitum. Ĉiuj eksperimentaj proceduroj estis faritaj konforme al la gvidlinioj de la Naciaj Institutoj pri Sano (NIH) kaj aprobitaj de la Komitato pri Prizorgado kaj Uzo de Bestoj de la Daejeon-universitato (Daejeon, Korea Respubliko).
2.4.2. Indukto de OA kun MIA en Ratoj
La bestoj estis randomigitaj kaj asignitaj al traktaj grupoj antaŭ la komenco de la studo (po grupo). MIA-solvo (3 mg/50μL de 0.9% saloza) estis rekte injektita en la intra-artika spaco de dekstra genuo sub anestezo induktita kun miksaĵo de ketamina kaj ksilazino. Ratoj estis dividitaj hazarde en kvar grupojn: (1) la sala grupo sen MIA-injekto, (2) la MIA-grupo kun MIA-injekto, (3) la SDE-traktita grupo (200 mg/kg) kun MIA-injekto, kaj (4). ) la indometacin- (IM-) traktita grupo (2 mg/kg) kun MIA-injekto. Ratoj estis administritaj buŝe kun SDE kaj IM 1 semajnon antaŭ MIA-injekto dum 4 semajnoj. La dozo de SDE kaj IM uzata en ĉi tiu studo baziĝis sur tiuj uzataj en antaŭaj studoj [10,13,14].
2.4.3. Mezuradoj de Hindpaw Weight-Bearing Distribution
Post OA-indukto, la origina ekvilibro en pezportkapablo de malantaŭpiedoj estis interrompita. Nekapacittestilo (Linton-instrumentado, Norfolk, UK) estis uzita por analizi ŝanĝojn en la pezporta toleremo. Ratoj estis zorge metitaj en la mezurĉambron. La pez-portanta forto penita per la malantaŭa membro estis averaĝita dum 3 s-periodo. La pezdistribuoproporcio estis kalkulita per la sekva ekvacio: [pezo sur dekstra malantaŭa membro/(pezo sur dekstra malantaŭa membro + pezo sur maldekstra malantaŭa membro)] × 100 [15].
2.4.4. Mezuradoj de Serumaj Citokinaj Niveloj
La sangospecimenoj estis centrifugitaj je 1,500 g dum 10 min je 4 °C; tiam la serumo estis kolektita kaj stokita je −70 °C ĝis uzo. La niveloj de IL-1β, IL-6, TNF-α, kaj PGE2 en la serumo estis mezuritaj uzante ELISA-kompletojn de R&D Systems (Minneapolis, MN, Usono) laŭ fabrikisto-instrukcioj.
2.4.5. Realtempa Kvanta RT-PCR-Analizo
Totala RNA estis ĉerpita el genua artikohisto uzante la TRI-reakciilon® (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, Usono), inverse transskribita en cDNA kaj PCR-amplifita uzante TM One Step RT PCR-ilaron kun SYBR-verda (Applied Biosystems). , Grand Island, NY, Usono). Realtempa kvanta PCR estis farita uzante la Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR-sistemon (Applied Biosystems, Grand Island, NY, Usono). La enkonduksekvencoj kaj la enketsekvenco estas montritaj en Tabelo1. Alikvotoj de specimenaj cDNA kaj egala kvanto de GAPDH cDNA estis plifortigitaj per la majstra miksaĵo TaqMan® Universal PCR enhavanta DNA-polimerazon laŭ fabrikisto-instrukcioj (Applied Biosystems, Foster, CA, Usono). PCR-kondiĉoj estis 2 minutoj je 50 °C, 10 minutoj je 94 °C, 15 s je 95 °C, kaj 1 minuto je 60 °C dum 40 cikloj. La koncentriĝo de cela geno estis determinita per la kompara Ct (sojla ciklonombro ĉe krucpunkto inter plifortiga intrigo kaj sojlo) metodo, laŭ fabrikisto-instrukcioj.
Osteoartrito (OA) estas la plej ofta muskoloskeleta malordo kaj la plej ofta degenera artika malsano en maljunuloj.1]. OA estas kondiĉo kaŭzita delvis de vundo, perdo de kartilaga strukturo kaj funkcio, kaj malreguligo de proinflamaj kaj kontraŭinflamaj vojoj.2,3]. Ĝi ĉefe influas la artikan kartilagon kaj subkondralan oston de sinoviaj artikoj kaj rezultigas artikan malsukceson, kondukante al doloro dum pezo-portado inkluzive de marŝado kaj starado.4].
Ekzistas neniu kuraco kontraŭ OA, ĉar estas tre malfacile reestigi la kartilagon post kiam ĝi estas detruita [5]. La celoj de kuracado estas malpezigi doloron, konservi aŭ plibonigi artikan moveblecon, pliigi la forton de la artikoj kaj minimumigi la malfunkciigajn efikojn de la malsano. Farmakologiaj traktadoj de OA celas redukti doloron por pliigi la komunan funkcion kaj vivokvaliton de la paciento. Kvankam kartilago-detruo estas la ĉefa okazaĵo en OA, la degenero de kolageno estas la fundamenta okazaĵo kiu determinas la nemaligeblan progresadon de OA en asocio kun inflamo.6,7]. Traktado kun kontraŭinflama kaj kondroprotekta agado estas atenditaj trankviligi doloron kaj konservi matrican integrecon en OA-pacientoj.
Tial malpliigo de inflamo verŝajne estos utila en administrado de OA. Lastatempaj studoj sugestas protektajn rolojn por herbaj rimedoj sur la progresado de OA, koncerne mildigadon de kondrocita inflamo kaj plia kartilago-detruo, per sia kapablo interagi kun artik-asociitaj histoj, rezultigante la mildigon de artika doloro.8].
La radiko deSaposhnikovia divaricataSchischkin (Umbelliferae) estis vaste uzita en tradicia medicino por la traktado de kapdoloro, doloro, inflamo, kaj artrito en Koreio kaj Ĉinio.9,10]. La diversaj farmakologiaj efikoj deSaposhnikovia divaricata(SD) ankaŭ inkluzivas kontraŭinflamatoriajn, analgezajn, kontraŭpiretikajn, kaj kontraŭartritajn trajtojn [9,11]. Lastatempa studo pruvis, ke SD-kromona ekstrakto posedas eblajn kontraŭreŭmatoidan artritajn efikojn en musmodelo de kolagen-induktita artrito.10]; tamen, malmultaj studoj estis faritaj por subteni la kontraŭinflamatorian kaj kontraŭartritan agadon deSaposhnikovia divaricataekstrakto (SDE).
Sekve, la nuna studo esploris la kontraŭinflamatoriajn kaj kontraŭosteoartrititajn agadojn de 70% etanola ekstrakto de SD. Unue, la kontraŭinflama efiko de SDE estis taksitain vitroen LPS-induktitaj RAW 264.7 ĉeloj. Poste, la kontraŭosteoartritis efiko de SDE estis mezurita per taksado de pezo-portanta distribuo, degenero de artika kartilago kaj inflamaj respondoj en ratmodelo de monosodia jodoacetato- (MIA-) induktita OA.